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重庆医药研发





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免疫荧光实验(IF)

主要技术原理

免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合来显示目的蛋白,主要包括蛋白和一抗结合,其次是带有荧光基团的二抗识别并结合一抗,在激光共聚焦系统下即可观察到荧光。

染色程序分为两步:第一步,用已知未标记的抗体加到未知抗原样本上;第二步,加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体。

如果第一步发生了抗原抗体反应,荧光标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体进一步结合,从而可鉴定抗原。

 

主要实验流程

细胞爬片制备;室温固定;洗涤;细胞打孔(针对胞内蛋白);洗涤;封闭;一抗孵育;二抗孵育;核复染;抗荧光淬灭剂封片;镜检。

 

注意事项

1、荧光显色很弱,可能是一抗浓度过低,提高抗体孵育浓度。

2、抗体结合能力差,可选用抗体质量好的公司购买。

3、孵育荧光二抗应严格避光。


交付标准

结果真实有效,高清原始图,实验报告,剩余材料返还。


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 案例展示:SW480共聚扫描



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