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详细内容

脊髓损伤模型

1、简介

脊髓作为人体低级反射中枢,其损伤直接影响到人体各器官、组织的正常生理功能,脊髓损伤是目前临床上多发且致残率较高疾病,给患者家庭、社会带来沉重负担。为此许多学者投入到了关于脊髓损伤的研究中,研究发现中枢神经损伤后仍具备一定的再生能力。为了找寻更好的治疗方法,标准的、可重复性高的动物模型建立尤为重要。近年来在脊髓损伤模型建立方面已有很大进展,在此回顾常用的脊髓损伤模型建立方法并进行相应评价。常用的脊髓损伤动物模型构建方法有Allen’s造模法、脊髓半横断造模法、脊髓完全横断造模法以及钳夹型造模法。

本文主要介绍经典的造模方法——脊髓完全横断造模法。

 

2、原理

脊髓完全横断造模法采用手术去除棘突锥板,使选定节段处脊髓暴露,用自制的银针钩从脊髓腹侧穿过,挑起脊髓,用显微剪剪断脊髓,银针自然脱出即可,然后横断处尾端切除2mm保证横断完全。

 

3、实验过程详解

3.1 实验材料

各类外科手术器械、脊髓拉钩、SD大鼠


3.2 实验过程

1 SD大鼠术前禁食12h。

2 大鼠称重,采用7%水合氯醛(5mL/kg)注射麻醉动物。

3 背部备皮,动物俯卧位于操作台,手术区皮肤消毒。

4 手术剪在大鼠胸椎T9-T11节段对应背部行正中直切口,长约2-3CM。

5 止血钳钝性分离开口皮肤与肌肉层,用自制拉钩牵拉皮肤充分暴露手术区视野。

6 眼科剪慢慢剔除T9-T11节段周边肌肉组织、棘突,充分暴露T10节段椎板,手术过程伴有持续出血,使用棉签清洁,使手术视野清晰。

7 左手固定大鼠,右手用止血钳咬除T10节段椎板,暴露T10节段脊髓。

8 脊髓拉钩挑起T10节段脊髓,手术剪小心剪断脊髓,然后横断处尾端切除2mm保证横断完全。

9 逐层缝合肌肉及组织。

10 放回笼中,正常饮食饲养。

11 术后护理:大鼠清醒后,找到腹部膀胱位置进行人工辅助排尿,每天2-3次,直至大鼠可自行排尿,并每天清洁大鼠生殖器周围尿液粪便等,用木屑垫料,保持生殖器干燥。


3.3 模型评价参考

1 BBB评分:表1为建模成功后对照假手术租的参考评分。

表1 各组脊髓损伤模型BBB评分

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注:A组:模型组;B组:假手术组


2 脊髓HE染色:

于倒置显微镜(×40)下观察脊髓组织形态特征。

假手术组无损伤,脊髓组织细胞形态正常,细胞核大小正常,排列整齐,未见出血点。

损伤组(SCI)出现炎症侵袭,有出血点产生,出现大量空洞,细胞核形态改变。


3 扫描电镜:

细胞内的变化情况如图:假手术组中髓鞘外形有规则,排列整齐紧凑,结构完整,板层结构致密均匀,线粒体饱满。

损伤组髓鞘外形不规则,排列混乱,板层结构排列松散、破裂、扭曲,线粒体肿胀,线粒体嵴断裂消失。


4、注意事项

1 大鼠需适应性喂养一周后方可进入实验,且需术前需禁食12h。

2 大鼠术后需人工排尿,注意按摩膀胱的力度,否则动物因膀胱破裂死亡。

3 术后保持生殖器周边清洁干燥,用木屑垫料。

 

5、参考文献

[1] 张鸿升,魏卫兵,周宾宾,崔俊武,李振兴,王永清.电针干预脊髓损伤大鼠受损节段缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子的表达[J].中国组织工程研究,2020,24(11):1701-1707.

[2] 邸楷. 川芎嗪联合骨髓间充质干细胞移植对脊髓损伤大鼠功能恢复的影响[D].山东大学,2019.

 


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