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详细内容

中脑动脉栓塞模型(MCAO)

1、简介

脑缺血一直是国内外研究的热点。然而成功地建立一个与人脑缺血缺氧损伤机制及临床表现相似的动物模型是深入研究脑缺血疾病的重要前提,国内外脑缺血动物模型的建立方法一般包括内膜损伤型、血管阻断型和异物栓塞型等。

大脑中动脉阻塞(MCAO) 是目前最常用的局灶性脑缺血模型,MCAO模型先阻断颈外动脉(ECA)及其分支,且阻断翼腭动脉(PPA) ,以切断颅外来源的侧副循环血流。从ECA插入尼龙线,经颈内动脉(ICA)到大脑前动脉(ACA),机械性阻断大脑中动脉(MCA)发出的血供来建立大脑中动脉缺血模型。

 

2、原理

中脑动脉栓塞模型(MCAO)经颈外动脉(ECA)或颈内动脉(ICA)入颅将栓线插入大脑中动脉(MCA),从而阻塞来自栓塞侧的大脑前动脉的血供,以及堵塞接受后交通动脉血供的的颈内动脉颅内段。 

 

3、实验过程详解

3.1 实验材料

各类手术器械、栓线、维纳斯剪、自制拉钩、SD大鼠


3.2 实验过程

1 SD大鼠术前禁食12h。

2 大鼠称重,采用7%水合氯醛(5mL/kg)注射麻醉动物。

3 颈部备皮,动物仰卧位于操作台,医用胶带固定四肢,手术区皮肤消毒。

4 手术剪沿颈部正中做长约2cm切口。

5 牵开皮肤后,可见两瓣颌下腺,小心沿中间剪开,止血钳从中间沿右侧颌下腺钝性分离皮下肌肉、筋膜等组织,找到颈总动脉大致位置,可见颈总动脉明显跳动。

6 继续钝性分离覆盖于颈总动脉的肌肉组织,小心分离迷走神经,将颈总动脉周边筋膜组织分离干净,分离出完整的颈总动脉段。

7 继续向远心端分离,小心分离出Y字型分叉,尽可能多的分离出颈外动脉和颈内动脉。

8 血管夹暂时夹闭颈总动脉和颈内动脉,结扎远心端颈外动脉,于颈外动脉近心端备线,烧红的镊子熔断颈外动脉。

9 将熔断的颈外动脉牵拉至与颈内动脉成一条直线,维纳斯剪剪开一V型小口,将栓线插入动脉,至颈内动脉夹闭口,稍微拉紧颈外动脉的备线,松开颈内动脉的血管夹,继续缓慢插入栓线。

10 当栓线到达标记位置时,且明显感到前进阻力,停止插线,将备线拉紧打结。

11 等待1.5h。

12 1.5h后,打开切口,讲栓线轻轻拔出(将栓线钝性头端留在血管内堵住切口)。

13 逐层缝合。

14 术后大鼠放回笼中,自由饮食饮水。


3.3 模型验证

1 神经行为学检查:

按照如下评分标准,对术后清醒的大鼠进行Longa评分:

神经学检查分5个等级:

0分:正常,无神经功能缺损;

1分:左侧前爪不能完全伸展,轻度神经功能缺损;

2分:行走时,大鼠向左侧(瘫痪侧)转圈,中度神经功能缺损;

3分:行走时,大鼠身体向左侧(瘫痪侧)倾倒。重度神经功能缺损;

4分:不能自发行走,有意识丧失。

造模成功大鼠术后与假手术对照组相比,评分有明显差异,下表为造模成功的评分参考:


表1 各组神经行为学检查评分(分,图片1.png±S)

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注:与假手术组A组相比,模型组B组*P<0.05


2 TTC染色:TTC染色结果显示,模型组与对照组相比有明显的梗死区域,对照组大脑切片全红,模型组大鼠右侧大脑有明显的白色梗死区域。


3 海马Nissle染色、HE染色:海马Nissle染色(400x)和HE染色(200x)结果显示,对照组和模型组相比,海马CA1区锥体细胞层次分明,排列整齐紧密,胞质均质红染,核大而圆,核仁清晰。模型组海马锥体细胞不同程度的减少,排列散乱,细胞轮廓模糊,胞质嗜酸性增强,核染色质不均匀,核周间隙增大,可见数量不等的缺血坏死细胞,呈梭形或三角形,深染成紫蓝色。

 

4、注意事项

1 大鼠需适应性喂养一周后方可进入实验,且需术前需禁食12h。

2 颈部钝性分离时注意不要伤到颌下腺,可从两瓣颌下腺正中切口进入,再从右侧颌下腺钝性分离。

3 小心分离颈总动脉,注意不要伤到与之伴行的迷走神经。

4 插栓线时先稍稍拉紧备线,不可过松(出血),也不可过紧(栓线难插,且无法掌控到头的阻力感)。

5 当插入栓线有阻力感时立即停止插线,此时可见栓线的标记处到达Y型分叉处。

6 1.5h或2h后别忘记拔出栓线。

7 术后大鼠完全清醒前最好独笼饲养,并且注意保暖。

 

5、参考文献

[1] 石将通,赵忠. 蒙息标,田顺亮. 线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型手术操作的研究进展[J].  中国比较医学杂志. 2014(07).

[2] 张小冲,赵浩,马建华,刘宁. 线栓法大鼠MCAO模型的实验研究[J]. 医学研究杂志. 2013(06).

[3] 冯珂,纪立金. 线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型的体会[J]. 辽宁中医杂志. 2013(01).

[4] 崔景军,何娇君,李晶,杜元灏. 大鼠大脑中动脉梗死模型的评价标准探讨[J]. 天津中医药. 2013(01).


 

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