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详细内容

脓毒症

 1、简介

脓毒症是指由感染因素引起的全身炎症反应综合征。严重者可导致器官功能障碍和(或)循环障碍,是严重创伤、烧伤、休克、感染和外科大手术等常见的并发症。按脓毒症严重程度可分脓毒症、严重脓毒症和脓毒性休克,进一步发展可导致多器官功能障碍综合征等。目前模拟临床脓毒症最佳的动物模型为啮齿类动物的盲肠结扎穿孔(CLP)模型。


2、原理

动物在实验前1天禁食,腹腔注射麻醉,于小鼠腹正中线做切口,找出盲肠并结扎其根部,选用8号针头在与肠系膜相对的盲端肠壁浆膜面贯通穿刺已结扎盲肠1次造2个孔,挤出肠内容物少许,4-0丝线逐层关闭腹腔。


3、实验过程详解

3.1 实验材料

各类手术器械、1mL注射器、C57BL/6小鼠

 

3.2 实验过程

1 以C57BL/6小鼠脓毒血症模型为例,7%水合氯醛腹腔注射(5 mL/kg)麻醉。

2 待小鼠麻醉后,剃去小鼠腹部被毛,75%酒精消毒小鼠腹部皮肤。

3 沿腹中线位置剪开1-2 cm开口,分离表皮和肌层。

4 找到盲肠,小心分离盲肠,避免伤害肠系膜血管。

5 在盲肠长度1/2或3/4的位置用3号线结扎。

6 结扎后使用8号针头在盲肠盲端以上约0. 5 cm处横穿扎孔,用针头来回贯穿两次。

7 从针孔挤出少量肠内容物。

8 将盲肠放回腹腔,尽量避免肠内容物粘附在手术切口。

9 逐层缝合肌肉层和皮肤。

10 术后给予每只小鼠皮下注射1 mL 37C预热的生理盐水补充液体,假手术组除不进行盲肠结扎和穿孔外,其余操作同手术组。

 

3.3 模型验证

1 术后观察:CLP组小鼠的外观症状术后小鼠精神状态欠佳,行动迟缓,出现被毛蓬松、蜷缩少动以及饮食饮水减少现象,眼睑部出现粘稠分泌物,小鼠肛门处有粪便粘连,尿液浑浊。对死亡小鼠解剖可见腹腔充满浑浊的渗出液,肠道黏连。


2 组织病理切片:显微观察结果:假手术组小鼠肺泡间隔组织结构完整,肺部巨噬细胞丰富,肝脏肝小叶结构完整,肝组织结构紧密完整,脾结构完整,脾小结与周围组织界限清晰,淋巴小结结构完整,淋巴小结中有大量的单核细胞,淋巴细胞和中性粒细胞;CLP组小鼠的肺泡间隔增宽,有的肺泡结构已破坏,并伴有出血和浆液性渗出,肝组织间隙增大,肝细胞有坏死现象,肝小叶排列紊乱,门管区巨噬细胞和淋巴细胞浸润,炎性细胞增多,脾小梁结构几乎消失,脾小体结构不明显,脾实质细胞以及支持组织有不同程度的变性和坏死,出血明显,淋巴小结结构被破坏,淋巴小结中的免疫细胞游走耗竭。

 

4、注意事项

1 建模前应禁食24h,否则肠容物影响实验。

2 结扎盲肠要不阻断血流。

3 穿刺后要肉眼可见挤出肠容物。

4 术后密切观察小鼠生存情况。

 

5、参考文献

[1] 杨睿,王东强,李志军. 盲肠结扎穿刺小鼠脓毒症模型改良[J]. 中外医疗,2014,33(05):37-39.

[2] 韩靖,杜玉明,袁聪俐,华修国,李岩. 小鼠盲肠结扎与穿刺脓毒症模型的建立与分析[J]. 上海交通大学学报(农业科学版),2017,35(04):1-6.

[3] 荆喜中, 贾欢欢, 罗挺. 小鼠脓毒症模型的建立和评价[J]. 中国实验动物学报, 2016(2):158-163.

[4] 汤耀卿,李磊. 脓毒症动物模型制作方略及应用[J]. 中华实验外科杂志,2006.12.001.

[5] 杨睿,王东强,李志军. 盲肠结扎穿刺大鼠脓毒症模型改良[J]. 中外医疗,2014(5):37-39.

[6] 何振华. 脓毒症大鼠模型的初步探索与建立[D]. 广西医科大学,2013.



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