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重庆医药研发
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详细内容

SD乳大鼠原代小胶质细胞培养

实验动物

新生 SD 乳大鼠。


主要试剂

胎牛血清,DMEM/F12,多聚赖氨酸,胰蛋白酶等。


实验步骤

1 取材:取新生 SD 乳大鼠,浸入 75 %酒精中消毒,取出后剪下头颅,掀开头盖骨,取出大脑,放入冰冷的PBS液中,清洗后放入另一干净的培养皿中。解剖显微镜下剥离脑膜,去除海马、中脑等,分离出大脑皮质,出血点必须去掉。

2 消化组织收集小胶质细胞:收集好皮质后,放入装有冷的 PBS液的培养皿中稍加洗涤,剪碎,转入离心管中,然后吸除PBS。加入 0.025%胰酶 3 mL,放入37℃培养箱中消化至少15 min,出现聚团现象发生为止。消化过程中每 5 min 自培养箱中取出稍加晃动,接着加培养液,终止消化。

3 小胶质细胞纯化:采用直立手摇法 +差速贴壁法。

 

技术应用

细胞炎症模型构建、重金属细胞毒性反应,小胶质免疫功能研究等。


难点

细胞不增殖,需反复多次培养,杂细胞多不易剔除,耗时长,中老年鼠分离难度大。

 

细胞形态展示

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纯化后的小胶质细胞  100x


77_画板 1.jpg

14天 小胶质细胞 100x


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慢病毒感染



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