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重庆医药研发
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详细内容

磁珠分选细胞

原理

免疫磁珠细胞分选法是把细胞用超级顺磁性的(MACS微型磁珠)特异性地标记,磁性标记完后,把这些细胞通过一个放在强而稳定磁场中的分选柱。分选柱里的基质造成一个高梯度磁场。被磁性标记的细胞滞留在柱里而未被标记的细胞则流出。当分选柱移出磁场后,滞留柱内的磁性标记细胞就可以被洗脱出来,这样就完全可以获得标记和未标记的两个细胞组份。


实验流程

1 离心收集待分离细胞,用少量PBE孵育液(0.5%BSA、0.08%EDTA PH7.2 PBS ,真空抽滤除菌及液体内气体)充分混悬细胞(0.5mL/1×108细胞),加入一抗(10-20μg/mL终浓度),4°C孵育30分钟。

2 用20倍体积PBE洗细胞一次,再加PBE(0.3mL/1×108细胞)充分混悬细胞后,加入相应二抗包被的超微磁珠,混匀后置8-15° C孵育10-15分钟。

3 将分离柱安装入磁场中,加入0.5mL PBE,在重力作用下自然流尽,以预处理分离柱。


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实验结果     

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常见问题分析

1 磁珠分选方法有哪些?

答:一般两种方法:正选法-磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞;负选法-磁珠结合不需要的细胞,游离于上清液的细胞为所需细胞。一般而言,负选法比正选法的磁珠用量大;


2 磁珠分选技术有点有哪些?

答:稳定、高质量的分选(可获得高纯度(90-99%)、高回收率的分选细胞群);对细胞无损伤;操作简便;分选后细胞适用于后续实验;流式细胞术、显微镜分析和分子生物学研究显示MACS分选对细胞没有任何影响;分选后细胞适用于细胞培养和体内实验。此外,分选得到的标记和未标记细胞组分均可回收利用。


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