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ELISA检测

酶联免疫吸附剂测定(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA),是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。


基本原理

1 使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。

2 使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。由于酶的催化频率很高,故可放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度。

在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应,再用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应底物后,底物被酶催化为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据反应后颜色的深浅进行定性或定量分析。

博艾迈迪森生物提供进口ELISA检测试剂盒,灵敏度高,特异性强,对不同样本类型和物种(包括人、小鼠和大鼠)靶标方便而敏感的定量分析。

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常见问题及原因分析

一、造成ELISA实验结果不正常的因素有哪些?

1 标本因素:样本需新鲜采集,防止污染,且准确稀释至适当的倍数。

2 试剂因素:ELISA试剂盒在保质期内,其他试剂如蒸馏水的水质等。

3 操作因素:注意操作细节,如加样不可太快,避免加在孔壁上;洗板过程中注意洗液不能溢出孔外;显色要注意控制时间等。


二、ELISA 的检测数据如何进行处理?

1 将得到的各个复孔浓度的吸光度值计算平均值。

2 按照横坐标为梯度稀释的标准品浓度,纵坐标为吸光度值做散点图,添加趋势线,利用多项式回归分析计算由以上数据产生的公式与 R2值(R2 值越接近1说明线性关系越好)。

3 根据公式及待测样本的平均吸光度值计算样本中目的蛋白的浓度。


 

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