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EMSA(凝胶迁移实验)

EMSA实验是基于DNA结合蛋白与DNA的特异性结合,依据实验需要,设计标记探针、非标记探针、蛋白特异性抗体等参照物,通过电泳迁移率的变化来进行定性和定量分析。博艾迈迪森生物为您设计合理、科学的实验方案,提供验证性EMSA(验证生物素标记探针与结合蛋白互作的EMSA),竞争性的EMSA(生物素标记探针、非标记探针与结合蛋白互作的EMSA)等实验服务。


EMSA实验流程简介

1 泳道设定及浓度梯度实验设计

2 生物素探针设计及合成 

3 EMSA电泳凝胶配置

4 EMSA反应

5 EMSA反应物电泳检测

6 显色反应

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常见问题

一、为什么看不到迁移带?

1 蛋白样本提取质量不高,蛋白降解或者提取量不足。

2 样本中没有可以与探针结合的蛋白。

3 探针与蛋白无特异性的相互作用。

4 转膜效率低,蛋白或者探针未转移到膜上。

5 曝光或者成像时间过短。

6 使用的抗体过度稀释。一般10-20ul的反应液需要使用0.5-1ul原倍的抗体 。

二、为什么实验背景高?

1 曝光或者成像时间过长。

2 封闭时间不足或者效率不高。

3 洗涤效果不佳。

4 实验过程中膜没有一直处于湿润状态。

三、EMSA测定需要多少量的蛋白与标记的探针?

对每一个特定的结合蛋白和探针,所用的纯化蛋白,部分纯化蛋白,粗制核抽提液需作优化,部分纯化蛋白与粗制核抽提液应保存在-80℃、探针应保存在-20℃以防止降解。无论探针或是结合蛋白都应避免多次冻融。



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