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CHIP实验 2D-DIGE实验

CHIP实验 2D-DIGE实验

  CHIP实验 DIGE —双向荧光差异凝胶电泳(Two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis,2D-DIGE),CHIP实验是在传统双向电泳的基础上发展而来的新型蛋白质组学定量技术,CHIP实验其分离蛋白质混合的原理与双向电泳是一致的,CHIP实验主要利用蛋白质的等电点和分子量的差异来分离蛋白质混合物,CHIP实验同时应用荧光染料的灵敏度及内标的使用等技术,CHIP实验使其在定量蛋白质组学的研究中效果明显优于传统双向电泳。

  DIGE使用的荧光染料有Cy2, Cy3和Cy5,它们能与蛋白质的赖氨酸侧链氨基反应而使蛋白质被标记,被标记蛋白质的等电点和分子量不受影响,等量混合标记好的蛋白质后进行双向电泳,不同凝胶之间可以通过cy2内标匹配,消除凝胶之间的差异,蛋白质表达量的变化则通过cy3和cy5不同荧光的强度来体现。

  二、与常规双向电泳后,银染或考染胶相比,DIGE具有以下优势:


  1、灵敏度高,低可检测到125pg的蛋白质;


  2、高效性,同一块凝胶上可以电泳两个样品,减轻了工作量;


  3、线性范围更广,动态范围高达10-5;


  4、定量, 采用内标消除了凝胶与凝胶之间的实验误差,显著提高了实验的度和可重复性;


  5、统计学分析,ImageMaster7.0(DIGE)软件可以得到统计学可信的结果,降低了操作者之间的偏差。


 


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