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重庆医药研发





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iTRAQ医学实验

iTRAQ医学实验

  背景简介:iTRAQ和TMT的技术原理一样,所不同的是二者的分子结构有差异。与SILAC相比(标记蛋白质),iTRAQ和TMT是对肽段进行标记的。依据iTRAQ/TMT标签的质量数差异,通过MS实现对多组样品中的蛋白质进行相对定量:


  SILAC是通过MS( MSl)对蛋白质进行定量,而iTRAQ/TMT是通过二级MS( MS/MS.MS2)进行定量的;


  iTRAQ/TMT能兼容来源的蛋白质样品,并且能同时分析多达8-10组的样品,分析通量高。

  

  试验流程


  1、分别提取蛋白质并定量;


  2、Trypsin分别对蛋白进行酶解,提取肽段;


  3、用不同质量数的iTRAQ/TMT标签分别对肽段样品进行标记:


  4、标记完成后,混合样品,用SCX进行组分分离(15-20组分);


  5、对每个组分进行LC-MS分析:


  6、蛋白质鉴定与定量分析,筛选差异表达的蛋白;


  7、生物学实验验证(Western blot,EUSA等):


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